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轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

簡(jiǎn)要描述:轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)產(chǎn)品特點(diǎn):1、靈敏度高,抗污染能力強,定量準確,重復性好;2、樣本處理與PCR擴增在同一個(gè)PCR反應管中即可完成;3、無(wú)需加熱
產(chǎn)品說(shuō)明:1.高便捷性。 2.靈敏度高。 3.特異性強。 4.精密性好。 5.結果準確可靠。 6.嚴格的質(zhì)量標準。
結構及組成:聚合酶鏈式反應液(PCR反應液)、RNA

  • 產(chǎn)  地:上海
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2022-02-10
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:3005

詳細介紹

品牌其他品牌貨號HXG740
規格50T供貨周期現貨
主要用途科研使用應用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

       轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)

產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng):轉基因大豆 MON87705 品系核酸檢測試劑盒 (熒光-PCR 法)

Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)

【包裝規格】50T/盒

本試劑盒適用于檢測轉基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用國家標準的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉基因成分的檢測。

【試劑組成】

稱(chēng)

酶液

50μL×1 管

MON87705 反應液

500μL×2 管

MON87705 陽(yáng)性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說(shuō)明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,反復凍融次數不超過(guò) 5 次。有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】稱(chēng)取 200g 樣品。【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長(cháng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標本運送應采用 0℃。

轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1 樣本前處理

固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

1.2 DNA 提取

對于固體標本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:

1) 每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱(chēng)取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;

2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;

3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液:異戊醇溶液各抽提一次;

4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5,-20℃放置 2-3h;

5)  4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說(shuō)明操作。

2. 試劑配制(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照;樣品每滿(mǎn) 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑

MON87705 反應液

酶液

用量

20μL

1μL

3. 加樣(樣本處理區)

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

1.1 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道

Reporter Dye)FAM, 淬滅通道Quencher Dye)選擇 NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

1.2 推薦循環(huán)參數設置:

步驟

循環(huán)數

溫度

時(shí)間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法) 結果分析判定

結果分析條件設定

設置 Baseline  Threshold:一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析,當曲線(xiàn)出現整體傾斜時(shí),根據分析后圖像調節 Baseline  start (一般可在 3~15 范圍內調節)、stop (一般可在 5~20 范圍內調節),以及Threshold  Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照),重新分析結果。

 結果判斷

陽(yáng)性:檢測通道 Ct ≤35,且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn);

可疑:檢測通道 35<Ct ≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct ≤ 38,且曲線(xiàn)有明顯的增長(cháng)曲線(xiàn),判定為陽(yáng)性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

3. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗視為無(wú)效。




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